諾如病毒膠體金檢測(cè)試紙

廣州健侖生物科技有限公司

諾如病毒，又稱諾瓦克病毒是人類杯狀病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中諾如病毒（Norovirus,NV）屬的一種病毒。是一組形態(tài)相似、抗原性略有不同的病毒顆粒。

諾如病毒感染性腹瀉在*范圍內(nèi)均有流行，全年均可發(fā)生感染，感染對(duì)象主要是成人和學(xué)齡兒童，寒冷季節(jié)呈現(xiàn)高發(fā)。美國每年在所有的非細(xì)菌性腹瀉暴發(fā)中，60-90%是由諾如病毒引起。荷蘭、英國、日本、澳大利亞等發(fā)達(dá)國家也都有類似結(jié)果。在中國5歲以下腹瀉兒童中，諾如病毒檢出率為15%左右，血清抗體水平調(diào)查表明中國人群中諾如病毒的感染亦十分普遍。

“諾如病毒”感染性腹瀉屬于自限性疾病，沒有疫苗和*藥物，公眾搞好個(gè)人衛(wèi)生、食品衛(wèi)生和飲水衛(wèi)生是預(yù)防本病的關(guān)鍵，要養(yǎng)成勤洗手、不喝生水、生熟食物分開，避免交叉污染等健康生活習(xí)慣。

潛伏期多在24～48h，zui短12h，zui長72h。感染者發(fā)病突然，主要癥狀為惡心、嘔吐、發(fā)熱、腹痛和腹瀉。兒童患者嘔吐普遍，成人患者腹瀉為多，24h內(nèi)腹瀉4～8次，糞便為稀水便或水樣便，無粘液膿血。大便常規(guī)鏡檢WBC<15，未見RBC。原發(fā)感染患者的嘔吐癥狀明顯多于續(xù)發(fā)感染者，有些感染者僅表現(xiàn)出嘔吐癥狀。此外，也可見頭痛、寒顫和肌肉痛等癥狀，嚴(yán)重者可出現(xiàn)脫水癥狀。

【包裝規(guī)格】

20 測(cè)試/盒

【預(yù)期用途】

諾如病毒膠體金檢測(cè)試紙 用于體外診斷。諾如病毒抗原快速檢測(cè)試劑卡（免疫層析法）是用

免疫層析的方法快速定性

測(cè)定人糞便樣本中，基因1型（GGI）和基因2型（GGII）的諾如病毒。該試劑可以協(xié)助診斷胃腸

炎，分析有疑似諾如病毒胃腸炎癥狀的兒童和成人的糞便樣本。

【主要組成成分】

試劑盒內(nèi)的試劑足夠進(jìn)行20次檢測(cè)

測(cè)試卡 Cassette 20次檢測(cè) 內(nèi)裝20個(gè)獨(dú)立包裝的測(cè)試卡

稀釋緩沖液 Diluent 30 ml 樣本稀釋緩沖液，氯化鈉蛋白緩沖液，含0.1% Kathon CG;

開瓶即用，藍(lán)色洗液 Wash 10ml 洗液，磷酸化的氯化鈉，含0.1% Thimerosal，開瓶即用

酶標(biāo)記物1 Conjugate│1 7ml 穩(wěn)定蛋白溶液中的生物素標(biāo)記的抗諾如病毒抗體，開瓶即用，

酶標(biāo)記物2 Conjugate│2 5ml 穩(wěn)定蛋白溶液中的鏈霉菌過氧化物酶，開瓶即用

底物 Substrate 7ml */TMB，開瓶即用吸液管 Pipet 25支 每包中裝有25支有刻度標(biāo)記的一次性塑料吸樣管

【儲(chǔ)存條件及有效期】

4-30°C保存，必須在有效期前使用。過有效期之后，產(chǎn)品的質(zhì)量保證不再有效。同樣，如果檢測(cè)卡的外殼破損將會(huì)使檢測(cè)卡潮濕，我們將不能保證檢測(cè)卡適合使用。

有效期：6個(gè)月

【樣本要求】

糞便樣本必須使用沒有任何添加劑的干凈容器收集，試驗(yàn)前儲(chǔ)存于溫度應(yīng)為2-8 °C。在病人癥狀出現(xiàn)后（腹瀉和嘔吐），應(yīng)盡快進(jìn)行樣本采集，因?yàn)榘Y狀出現(xiàn)后1-3 天，病毒的清除達(dá)到zui大化。如果標(biāo)本保存時(shí)間超過3 天，必須儲(chǔ)存于-20 °C。在實(shí)驗(yàn)開始前，冷凍的樣本必須充分解凍，回復(fù)至室溫。與新鮮樣本一樣，復(fù)溫的樣本也必須在檢測(cè)前，和試劑充混合。應(yīng)避免樣本多次凍融。

采用直腸拭子采集樣本時(shí)，必須得到足夠的糞便樣本（大約100 mg）以確保檢測(cè)進(jìn)行。

【檢測(cè)方法】

1.常規(guī)信息

檢測(cè)前，樣本、稀釋緩沖液、試劑和檢測(cè)卡必須恢復(fù)至室溫（20 - 25 °C）。檢測(cè)卡必須在即將使用前才可以從外包裝中取出，檢測(cè)卡一旦從外包裝中取出或被使用，則不可以再次使用。檢測(cè)不可以在陽光直射下進(jìn)行。

2.準(zhǔn)備樣本懸濁液

取1 ml樣本稀釋緩沖液Diluent 加入貼好標(biāo)簽的試管內(nèi)。對(duì)于液態(tài)糞便樣本，可用盒內(nèi)的一次性吸液管Pipet 吸取100 μl樣本（至吸液管的第二個(gè)增粗處），懸空滴加于事先已加入提取緩沖液的標(biāo)記試管中；對(duì)于固態(tài)糞便樣本，取50-100mg樣本（豌豆大小）加入緩沖液中。樣本必須被混勻，可利用試管反復(fù)吸放，或者用漩渦混勻器將糞便懸浮液混勻。至少沉淀2分鐘后，取200- 500 μl上清液置于另一干凈試管中（或者未包被的微孔中）。

3.將檢測(cè)卡Cassette從外包裝中取出，將其放置在水平的墊子上。

4.用已經(jīng)處理過同一樣本的一次性吸管，從糞便懸濁液中吸取250 μl上清液（*個(gè)標(biāo)記處），

加入干凈的、標(biāo)記的試管中。

5.在試管中加入6 滴酶標(biāo)記物1 Conjugate│1（滴加時(shí)保持小瓶垂直）。

6.通過吸放的方式將混合液*混勻后，用一次性吸管將其全部吸出，以緩慢平穩(wěn)連貫的水流，注入檢測(cè)卡的加樣孔中。將吸管傾斜約 45°}，管口指向反應(yīng)窗，這樣混合物就可以全部流至反應(yīng)窗內(nèi)。__

7.將檢測(cè)卡在室溫下（20 - 25 °C）孵育10 分鐘。確保反應(yīng)窗的檢測(cè)膜已被樣本混合液充分浸濕，否則請(qǐng)將100 μl 稀釋緩沖液滴入加樣孔中。

8.在反應(yīng)窗中加入4 滴酶標(biāo)記物2 Conjugate│2（滴加時(shí)保持小瓶垂直），再于室溫下孵育至少1分鐘。

9.在反應(yīng)窗中，加入10滴洗液 Wash，待洗液被*吸收后，再進(jìn)行后續(xù)操作。

10.在反應(yīng)窗中加入6 滴底物 Substrate（滴加時(shí)保持小瓶垂直）。

11.之后的3分鐘內(nèi)，讀出檢測(cè)結(jié)果。在3分鐘后出現(xiàn)的有色條帶，沒有診斷意義

【參考值（參考范圍）及檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1. 在加入底物后3 分鐘之內(nèi)，在良好采光直視下讀出的檢測(cè)結(jié)果，是zui可靠的。

2. 查看在反應(yīng)窗的“C”標(biāo)記處，是否有出現(xiàn)藍(lán)色的條帶（所謂的內(nèi)部質(zhì)控線），在反應(yīng)窗的“T”標(biāo)記處是否出現(xiàn)藍(lán)色的條帶（所謂的檢測(cè)線）。顏色的強(qiáng)度可能會(huì)由淺變深。

3. 陽性結(jié)果：加入底物之后3 分鐘內(nèi)，如果同時(shí)出現(xiàn)兩條藍(lán)色的條帶（檢測(cè)線“T”和質(zhì)控線“C”），可判別為陽性結(jié)果。顏色可由淺變深。如果條帶只有部分清晰出現(xiàn)，也可以解釋為陽性。膜的其他顏色改變或其他部位的陰影，都不能解釋為陽性結(jié)果。

4. 陰性結(jié)果：加入底物的3 分鐘后，就可以開始判別是否為陰性結(jié)果或無效結(jié)果了。如果只在反應(yīng)窗的質(zhì)控帶“C”處出現(xiàn)藍(lán)色的條帶，在檢測(cè)帶“T”處沒有藍(lán)色條帶出現(xiàn)，則可判定為陰性結(jié)果。陰性結(jié)果說明，在樣本中沒有諾如病毒的抗原存在，或抗原的量低于檢測(cè)限。

5. 無效結(jié)果：在反應(yīng)窗的檢測(cè)帶“T”和質(zhì)控帶“C”處，均無藍(lán)色條帶出現(xiàn)，或者只在檢測(cè)帶

“T”出現(xiàn)條帶，這兩種情況均說明檢測(cè)無效，需要用新的檢測(cè)卡重新進(jìn)行檢測(cè)。

諾如病毒抗原快速檢測(cè)卡（免疫層析法）檢測(cè)結(jié)果的解釋：

【注意事項(xiàng)】

1. 僅用于體外診斷。

2. 實(shí)驗(yàn)必須由經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)的人員操作。必須嚴(yán)格按照醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)章制度操作。

3. 產(chǎn)品操作時(shí)必須嚴(yán)格按照說明書操作。

4. 樣品稀釋緩沖液中含有Kathon CG 作為防腐劑，此物質(zhì)不能接觸皮膚或粘膜。

5. 樣本和試劑不可以用嘴吸取。

6. 樣本和試劑避免接觸受傷的皮膚或者粘膜。

7. 處理樣本時(shí)應(yīng)該戴一次性手套，完成試驗(yàn)后要洗手。

8. 禁止在樣本和試劑實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)吸煙、吃東西或喝水。

9. 所有試劑和材料如果接觸有潛在感染性的樣本，應(yīng)與樣本一樣，立即用適當(dāng)?shù)南緞ㄈ纾?/p>

次氯酸鈉）或者高壓高溫121℃至少1 小時(shí)處理。

10. 諾如病毒抗原快速檢測(cè)試劑卡（免疫層析法）必須在效期內(nèi)使用。所有的試劑都被調(diào)整

為zui適宜的活性狀態(tài)。稀釋或改變這些試劑將減少其活性。如果不按照說明中的時(shí)

間和溫度進(jìn)行操作，將會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

11. 不同批號(hào)的諾如病毒抗原快速檢測(cè)試劑卡（免疫層析法）試劑盒中的試劑不可以混用。

12. 試劑和樣本必須避免微生物的污染，否則將會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

13. 吸取每個(gè)樣本時(shí)，必須使用不同的吸管，以防止交叉污染及錯(cuò)誤結(jié)果

14. 每個(gè)檢測(cè)卡只可使用一次

試劑盒組成

測(cè)試卡     Cassette      20次檢測(cè)   內(nèi)裝20個(gè)獨(dú)立包裝的測(cè)試卡

稀釋緩沖液 Diluent       30 ml 樣本稀釋緩沖液，氯化鈉蛋白緩沖液，即用，含0.1% Kathon CG;開瓶即用，藍(lán)色

洗液      Wash          10ml 洗液，磷酸化的氯化鈉，含0.1% Thimerosal，開瓶即用

酶標(biāo)記物1 Conjugate│1   7ml 穩(wěn)定蛋白溶液中的生物素標(biāo)記的抗諾如病毒抗體，開瓶即用，藍(lán)色

酶標(biāo)記物2 Conjugate│2   5ml 穩(wěn)定蛋白溶液中的鏈霉菌過氧化物酶，開瓶即用

底物       Substrate    7ml */TMB，開瓶即用

吸液管     Pipet         25支每包中裝有25支有刻度標(biāo)記的一次性塑料吸樣管

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提取時(shí)，將無菌磁珠和糞便同時(shí)放入離心管震蕩2次，每次30s，震蕩間歇置于冰上孵化2min。zui后用Nanodrop進(jìn)DNA濃度檢測(cè)。
2.    DNA測(cè)序
每個(gè)樣品構(gòu)建一個(gè)文庫，插入片段為350bp，測(cè)序策略：Illumina GAIIx、HiSeq 2000，PE100。
3.    DNA組裝和基因集構(gòu)建
（1）DNA組裝：去除接頭等低質(zhì)量reads和宿主基因組DNA數(shù)據(jù)，得到平均每個(gè)樣品6.13Gb，共1758 Gb細(xì)菌質(zhì)量數(shù)據(jù)。73.7%的reads被組裝成3200萬個(gè)contigs，每個(gè)contigs長度均超過500個(gè)堿基，總的contig長度為45.7 GB。
（2）基因集構(gòu)建：GeneMark用來預(yù)測(cè)每個(gè)樣品contigs的開放性閱讀框（ORFs）；分別與人和小鼠進(jìn)行一一比對(duì)，發(fā)現(xiàn)豬的腸道基因集整體平均ORF長度和組裝的N50 contig長度較短。利用BLAT對(duì)所有樣品基因進(jìn)行成對(duì)比較構(gòu)建非冗余基因集；基于NCBI-NR數(shù)據(jù)庫通過CARMA3對(duì)基因進(jìn)行分類；基于eggnog和KEGG數(shù)據(jù)庫進(jìn)行基因功能注釋。
4.    數(shù)據(jù)分析方法
（1）分類分析：屬、門、種水平的物種分類、MGS分析、KEGG功能基因分析、耐藥基因分析。利用Bray-Curtis距離定義樣品之間的差異，并通過二維非度量多維尺度法（NMDS）進(jìn)行可視化。
（2）豐度計(jì)算：基于 fitZig函數(shù)中的zero-inflated細(xì)菌斯混合模型進(jìn)行豐度計(jì)算。通過計(jì)算Spearman相關(guān)系數(shù)獲得參與檸檬酸循環(huán)的耐藥基因和酶的相關(guān)性。 為鑒定豬腸道宏基因組的性別差異，本文分別對(duì)來自兩個(gè)不同農(nóng)場(chǎng)相同品種的兩組豬（*組：11頭公豬，14頭母豬；第二組：10頭被閹割的公豬，10頭母豬。兩組豬飲食方式相同）進(jìn)行分析，利用iPath2.0將公豬和母豬之間的差異基因或酶注釋到KEGG代謝通路中。
（2）NR數(shù)據(jù)庫比對(duì)得到的微生物基因和MGS（matagenomic species）

Extraction, the sterile beads and faeces into the centrifuge tube shock 2 times, each time 30s, shaking intermittently placed on ice incubation 2min. Finally use Nanodrop into the DNA concentration test.
DNA sequencing
A library was constructed for each sample with a 350 bp insert, sequencing strategy: Illumina GAIIx, HiSeq 2000, PE100.
3. DNA assembly and gene set construction
(1) DNA assembly: Low-quality reads and host genomic DNA data, such as linker, were removed to give an average of 6.13 Gb per sample for 1758 Gb of bacterial mass data. 73.7% of reads were assembled into 32 million contigs, each with contigs longer than 500 bases and a total contig of 45.7 GB.
(2) Construction of Gene Set: GeneMark was used to predict the open reading frames (ORFs) of contigs of each sample. One-to-one comparison with human and mouse respectively revealed that the overall average ORF length of the intestine gene sets in pigs and the N50 contig shorter length. Non-redundant gene sets were constructed by pairwise comparison of all sample genes using BLAT; genes were classified by CARMA3 based on the NCBI-NR database; and gene function annotations were based on eggnog and KEGG databases.
4 data analysis methods
(1) Classification analysis: Species classification of genera, genus, species, MGS analysis, KEGG functional gene analysis and drug resistance gene analysis. Differences between samples were defined using the Bray-Curtis distance and visualized by two-dimensional non-metric multidimensional scaling (NMDS).
(2) Abundance calculation: Abundance calculation is based on the zero-inflated mixture of bacteria and bacteria in fitZig function. Correlation between resistance genes involved in citric acid cycle and enzymes was obtained by calculating Spearman's correlation coefficient. To identify the gender differences in porcine gut macrogenomes, two groups of pigs of the same breed from two different farms (group 1: 11 boars, 14 sows; group 2: 10 castrated boars , 10 sows, two groups of pigs eating the same way) were analyzed using iPath 2.0 to annotate the differential genes or enzymes between the boar and sow into the KEGG metabolic pathway.
(2) Comparison of the NR database with the obtained microbial gene and MGS (matagenomic species)