丹麥SSI鏈球菌血清分型說明書

應(yīng)用

丹麥國家血清研究院的診斷用鏈球菌抗血清用于通過Neufeld方法¹和Lancefield方法^2,3對鏈球菌進(jìn)行定性識別和分型。

簡介

丹麥國家血清研究院的鏈球菌抗血清在兔體內(nèi)培養(yǎng)。鏈球菌抗血清可用于對A、B、C、D和L群鏈球菌進(jìn)行識別以及對B群鏈球菌和豬鏈球菌進(jìn)行血清分型。抗血清供應(yīng)規(guī)格為1 mL瓶裝產(chǎn)品（以*作為防腐劑）。血清生產(chǎn)過程中在需要時(shí)采用吸附方法排除交叉反應(yīng)。

原理

Lancefield方法：當(dāng)一種酸性抗原提取物與直接針對細(xì)菌表面成分的特異性抗血清混合時(shí)，細(xì)胞之間將通過抗原-抗體鍵連接在一起而形成聚集（沉淀）。當(dāng)在毛細(xì)管內(nèi)反應(yīng)時(shí)，這種現(xiàn)象可以用裸眼直接觀察到。

Neufeld方法：通過將特異性抗血清與一種鏈球菌培養(yǎng)物混合，可以確定莢膜抗原。莢膜反應(yīng)是鏈球菌莢膜多糖與其同源性抗體之間發(fā)生原位免疫沉淀反應(yīng)的結(jié)果。顯微鏡下陽性反應(yīng)表現(xiàn)為莢膜可見和鏈球菌凝集。莢膜的大小取決于血清型和生長條件。

需要但未提供的材料

Neufeld檢測：

5%血液瓊脂平板

接種環(huán)

移液管或任何可以移取液滴的其它用具

載玻片和蓋玻片

浸油

pH 7.4的鹽水

相差顯微鏡（放大100 X，油浸物鏡）

Lancefield檢測：

5%血液瓊脂平板

葡萄糖肉湯

接種環(huán)

離心機(jī)

移液管或任何可以移取液滴的其它用具

0.06N, 0.1N和0.2N HCl溶液

水浴（100ºC）

酚紅（指示劑）

0.2N NaOH溶液

毛細(xì)管

步驟

通用

每一血清型將在Lancefield方法或Neufeld方法中顯示反應(yīng)陽性（在血清出廠證書上將指示優(yōu)先選擇的方法）。當(dāng)與陰性對照比較時(shí)，通常結(jié)果會(huì)更加明顯。

Neufeld檢測

1.    將一小滴（3-6 μL）鹽水滴在玻片上。

2.    從血液瓊脂平板上轉(zhuǎn)移小量培養(yǎng)物到玻片上，然后與鹽水混合均勻。

3.    加入等量抗血清，然后與液滴充分混合。

4.    立即在混合物上加蓋蓋玻片（必須保持濕潤）。

5.    在相差顯微鏡下觀察混合物。反應(yīng)可在半小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定（在未干燥的前提下）。

6.    如可見莢膜（細(xì)菌表現(xiàn)腫脹），則反應(yīng)為陽性。

Lancefield檢測（改良版本）

使鏈球菌于5%血液瓊脂平板上生長過夜。

1.    將少量菌落加入6 mL葡萄糖肉湯，然后在35-37ºC下培養(yǎng)過夜。

2.    將懸液以3000 rpm轉(zhuǎn)速離心10分鐘，然后移去上清液。

3.    將0.06N、0.1N或0.2N 的HCl溶液 0.1 mL加入細(xì)菌沉淀物中（在血清出廠證書上將指示優(yōu)先選擇的方法）。

4.    將酸性懸液置于水浴（100ºC）中加熱15分鐘。

5.    在自來水中冷卻酸性懸液。

6.    通過滴入0.2N NaOH溶液直至液體變?yōu)樽?/span>/橙色［使用酚紅作為pH指示劑，紅色（pH > 8.2）－黃色（pH < 6.4）］調(diào)整pH值至7左右。

7.    將懸液以3000 rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，然后將上清液（酸性抗原提取物）轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的玻片上。

8.    使用毛細(xì)管吸取等量的抗血清（首先）和酸性抗原提取物（其次）。必須將抗血清置于毛細(xì)管上部，以便使其擴(kuò)散通過酸性提取物。

9.    陽性反應(yīng)為發(fā)生沉淀。正對光源讀取結(jié)果。

保存條件與有效期限

避光保存于2-8°C。有效期限見包裝。有時(shí)在長期保存后可見因脂蛋白沉淀引起的混濁。采用離心（10,000g）然后過濾除菌（0.22 μm）的方法即可除去沉淀和/或污染物。

丹麥SSI鏈球菌血清分型說明書

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